產(chǎn)品描述:
在實(shí)體組織和細(xì)胞內(nèi),膽固醇酯既是構(gòu)成細(xì)胞質(zhì)膜的成分,也是細(xì)胞內(nèi)脂滴的主要組分。細(xì)胞內(nèi)膽固醇過度聚集與動脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞形成密切相關(guān)。實(shí)體組織和細(xì)胞的膽固醇測定遠(yuǎn)比血液膽固醇測定復(fù)雜。本試劑盒避免了有毒的有機(jī)溶劑抽提、繁雜的氮?dú)獯蹈珊椭|(zhì)復(fù)溶等步驟,采用高效能試劑裂解細(xì)胞和提取膽固醇,優(yōu)化了酶學(xué)反應(yīng)和操作步驟,簡單易行,靈敏度高,線性范圍20~5000 μmol/L。
檢測原理:
本試劑盒采用WHO、中國《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》推薦的酶學(xué)方法,結(jié)合經(jīng)典GPO Trinder酶學(xué)反應(yīng)1,2,原理如下:
(1) 膽固醇氧化酶將游離膽固醇氧化,反應(yīng)過程產(chǎn)生過氧化氫。
(2) 在過氧化物酶催化下進(jìn)行生色反應(yīng),在550nm有最大吸收峰,光密度值與膽固醇濃度成正比。
適于測定樣品:
脂肪含量較高的動物實(shí)體組織
組成 (105次微板測定或30次1 ml比色杯測定):
(1) 裂解液 100 ml
(2) R1試劑 16 ml
(3) R2試劑 4 ml
(4) 膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品粉末 1 管
儲存條件:4 oC保存 6個月有效
所需設(shè)備:
酶標(biāo)儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計。最佳工作波長550nm,如無此波長建議優(yōu)先選用570nm、次選530、490nm。
自備試劑:無水乙醇(濃度≥99.5%)
產(chǎn)品說明:
1. 維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、還原劑二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2. 不同類型的組織細(xì)胞內(nèi)總膽固醇和游離膽固醇的比例差異很大。延長反應(yīng)時間可能使游離膽固醇值增加因而使其值與總膽固醇值接近。由差值計算求得的膽固醇酯的值,主要適合血液樣品測定,可能不很適合細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯測定。其原因主要與細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯和游離膽固醇的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)、外流、儲存、分解、再酯化等諸多動態(tài)生物過程的非線性的高度復(fù)雜性有關(guān),還與現(xiàn)有測量方法的局限性有關(guān)。膽固醇(酯)的含量以及代謝方式在肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等不同類型的細(xì)胞中存在巨大差異。有時以差值計算的膽固醇酯出現(xiàn)背離和偏差,甚至為負(fù)值?;蛘邍L試用同位素標(biāo)記方法、薄層層析、HPLC等方法測定膽固醇酯,或許會有改善。
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