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描述：

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, ALP)，也稱堿性磷酸酯酶，是動(dòng)物和微生物生理過(guò)程中一種非常重要的酶，常見于具有活躍轉(zhuǎn)運(yùn)功能的細(xì)胞膜內(nèi)，如腎近曲小管的刷毛緣、小動(dòng)脈內(nèi)皮、肝臟毛細(xì)膽管膜、腎上腺、膀胱、腸上皮、附睪上皮的靜纖毛等處。在堿性環(huán)境中可以水解各種天然及人工合成的磷酸單酯化合物底物。堿性磷酸酶與人類疾病如高磷酸酯酶血病、一些骨骼和肝臟疾病的發(fā)生有關(guān)，被用作很多疾病的輔助診斷依據(jù)；檢測(cè)堿性磷酸酶的活性對(duì)于環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品質(zhì)量控制等方面具有重要的作用。此試劑盒采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法)，結(jié)果較金屬鹽沉淀法靈敏可靠。該試劑盒可用于骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片和梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色，其染片數(shù) 50~100 張。

原理：在 pH 9.2～9.8 的堿性條件下，細(xì)胞的堿性磷酸酶將底物磷酸萘酯水解，產(chǎn)生α-萘酚，α-萘酚再與偶聯(lián)重氮鹽生成有色沉淀，終產(chǎn)物的顏色因所用偶氮鹽的品種不同有所不同。本試劑盒α-萘酚與重氮?jiǎng)┕趟{(lán) RR 偶聯(lián)形成藍(lán)色偶氮沉淀物，沉淀物顯示的顏色深淺與堿性磷酸酶活性成正比。

組成： 

適用范圍：可用于骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片和梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色。

操作步驟： 

1. 將固藍(lán)試劑管短暫離心，以防開管后，固藍(lán)粉末損失，每管加純水1.25ml溶解固藍(lán)。固藍(lán)溶液最好在使用當(dāng)天配制。

2. 取適量固藍(lán)溶液與染液A按1:3的體積比混勻，用細(xì)菌濾器過(guò)濾，除去其中的渣滓及沉淀物。（剩余的未與染液A混合的固藍(lán)溶液，根據(jù)下次的預(yù)期用量，分裝密封避光保存于-20℃，避免反復(fù)開封與凍融，一個(gè)月內(nèi)有效。）

3. 將濾液滴加到玻片組織細(xì)胞處，若是組織切片，避光室溫孵育3~15min；細(xì)胞涂片或石蠟切片，避光室溫孵育30~40min，若著色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間，但不要超過(guò)1.5h。

4. 自來(lái)水流水洗1-2min，流水不能直接沖在組織上，水流速度不能快，以免損壞組織。

5. 滴加染液B復(fù)染，室溫孵育1-3min，水洗，方法同步驟4，若著色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

6. 鏡檢，或封片后鏡檢。

染色結(jié)果：堿性磷酸酶的活性部位呈藍(lán)色，細(xì)胞核被染成紅色，對(duì)比明顯。

血液、骨髓涂片結(jié)果判斷：一般以積分報(bào)告結(jié)果，根據(jù) 100 個(gè)中性粒細(xì)胞陽(yáng)性顆粒進(jìn)行 0-4 計(jì)分。 

說(shuō)明：

1. 將溶解后的固藍(lán)，與染液A混合后，往往會(huì)出現(xiàn)沉淀物，是未酯化的萘酚與固藍(lán)偶聯(lián)形成的，過(guò)濾后溶液清明略帶藍(lán)色。

2. 為防止染色過(guò)程中染液蒸干，可置入濕盒中避光孵育。

3. 在組織切片中，堿性磷酸酶可被下列物質(zhì)所抑制：碘液、15%醋酸、三氯醋酸、聚雌二醇磷酸酯、鈹、半胱氨酸、氰化物等。某些固定劑（如甲醛、丙酮、乙醇）和包埋過(guò)程（石蠟、聚乙二醇）都可在一定程度上抑制堿性磷酸酶活性，冰凍切片的包埋劑推薦普利萊的組織冰凍切片OCT包埋劑 C1400。

4. 由于偶聯(lián)重氮鹽生成的有色沉淀產(chǎn)物不溶于水，但溶于有機(jī)溶劑，所以封片時(shí)不能使用含二甲苯的封片劑，只能甘油明膠封片劑或水溶性封片劑。

5. 第一次使用本試劑盒時(shí)建議先取1-2個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)。