定量PCR(Quantitative PCR, qPCR)，也稱實時PCR(Real-time PCR)或者實時定量PCR，是通過對PCR擴增反應中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測從而實現(xiàn)對起始模板定量及定性分析。在實時熒光定量PCR反應中，引入了一種熒光化學物質(zhì)，隨著PCR反應的進行，PCR 產(chǎn)物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán)，收集一個熒光強度信號，從而通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化。該技術(shù)具有特異性強、靈敏度高、污染途徑少、檢測方法準確等特點，實現(xiàn)了PCR由定性到定量的飛躍，已成為國際公認的核酸定量的標準方法，廣泛應用于基因表達豐度、拷貝數(shù)等研究及臨床疾病檢測等許多領(lǐng)域。
普利萊的定量PCR(Quantitative PCR, qRCR)技術(shù)服務是采用SYBR Green I熒光染料法或TaqMan熒光探針法對DNA/RNA進行相對定量或絕對定量。相對定量：通過2-ΔΔCt法計算比較目的基因和內(nèi)參基因(常用GAPDH、β-actin和36B4等)的表達倍數(shù)差異進行相對定量；絕對定量：需要先制備標準品，然后在檢測目的基因的同時檢測標準曲線，通過比對標準曲線對未知濃度的樣品進行絕對定量，最終計算出樣品中特定核酸的拷貝數(shù)、摩爾數(shù)或者微克數(shù)等。普利萊擁有專業(yè)的技術(shù)團隊，可以針對客戶的不同實驗目的設計實驗方案，提供DNA、mRNA、長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA, lncRNA)水平、非編碼小RNA(non-coding small RNA, ncsRNA，包括miRNA、piRNA、siRNA、tRF等)相對定量或絕對定量的檢測服務，交付真實準確的原始數(shù)據(jù)和檢測報告?？蛻魞H需提供樣品和待檢測目的基因的信息，我們提供從樣品處理到最終的檢測報告的全程服務。
相對定量 | 絕對定量 | 定性分析 |
一般用于基因表達研究，通過比較樣品中目的基因cDNA的量來研究不同樣品間的mRNA表達量情況，內(nèi)參基因通常選用β-actin或GAPDH, 通過同時對內(nèi)參基因的實時檢測，可以對樣品間由于起始樣品量不同或者提取RNA 的效率不同造成的RNA 量誤差進行校正，在嚴格意義上實現(xiàn)對RNA 表達量的解析， 一般采用2-ΔΔCt法進行計算。 | 絕對定量需要構(gòu)建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品，使用已知濃度(拷貝數(shù))的標準品制作標準曲線后，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行絕對量或者起始拷貝數(shù)的分析。 | PCR反應結(jié)束后，PCR產(chǎn)物無需 電泳檢測，可以通過熒光定量 PCR 方法，簡單快速的對目的基 因進行高特異性、高靈敏度的檢 測；同時閉管操作可以有效防止反應產(chǎn)物的污染，廣泛應用于致病微 生物檢測、微生物品種鑒定以及基因型(SNPs) 解析等方面。 |
服務項目 | 服務內(nèi)容 | 周期 (工作日) | 價格 |
qPCR相對定量(SYBR Green I法) | 目的基因或內(nèi)參基因檢測 | 2-3周 | 詢價 |
qPCR絕對定量(SYBR Green I法) | 4-5周 | ||
qPCR相對定量(TaqMan法) | 3-4周 | ||
qPCR絕對定量(TaqMan法) | 4-5周 | ||
qPCR引物設計合成 | 優(yōu)化引物設計合成(染料法) | 1周 | 詢價 |
Taqman探針設計與合成 | 優(yōu)化引物/探針設計與合成(探針法) | 1-2周 | 詢價 |
定量PCR標準品構(gòu)建 | 絕對定量 | 1-2周 | 詢價 |
定量PCR標準曲線構(gòu)建 | 絕對定量 | 1周 | 詢價 |
其它定量PCR相關(guān)技術(shù)服務 | 自定義 | 咨詢 | 詢價 |
服務優(yōu)勢：
1.高品質(zhì)：擁有專業(yè)的技術(shù)團隊，提供嚴謹?shù)膶嶒炘O計，每個樣品均進行三次平行實驗，免費數(shù)據(jù)分析，交付原始檢測數(shù)據(jù)和定量PCR檢測報告；
2.服務全：基于多年的研發(fā)經(jīng)驗，提供從引物和探針設計到相對或絕對定量分析的全套服務，客戶可根據(jù)實驗需要選擇SYBR Green I熒光染料法或TaqMan熒光探針法；
3.效率高：成熟穩(wěn)定的檢測體系，多年的定量PCR檢測經(jīng)驗，可在最短時間內(nèi)交付檢測結(jié)果；
4.儀器好：擁有ABI7500、7900等qPCR儀，通量大，可靠性強。
服務內(nèi)容：
1.根據(jù)目的基因設計引物；
2. RNA抽提；
3. RNA定量及質(zhì)量檢測；
4.逆轉(zhuǎn)錄；
5.使用熒光染料SYBR Green法進行實時定量PCR；
6.數(shù)據(jù)處理；
7.向客戶提交數(shù)據(jù)分析結(jié)果與實驗報告。
送樣要求：
Total RNA/gDNA：50 ng/ul 以上，至少20ul，條帶無降解。需低溫運輸:
細胞： 107以上，需收集細胞沉淀，干冰運輸；
細菌/酵母菌：107以上，需收集菌體，完全去除培養(yǎng)液，立即放入液氮中，放-80℃冰箱凍存，干冰運輸;
組織：300mg以上，需干冰運輸;
血液：>1ml，需干冰運輸;
葉片：>100mg，需干冰運輸。
公司提供的結(jié)果:
(1) 原始數(shù)據(jù)（excel表）;
(2) 實驗報告（包括擴增曲線、融解曲線（SYBR Green I 法）、原始數(shù)據(jù)、標準曲線（絕對定量）、相對定量結(jié)果的柱狀圖等相關(guān)信息）
